制限酵素によるプラスミドの切断 受講生の半分の人には EGFP cDNA を組み込んだ pBluescript II SK+ プラスミド DNA を 渡します。 残りの半分の人には，約 700 bp の cDNA を組み込んだ pQE30 プラスミドを 渡します。 1． 1.5 mL エッペンチューブを用意し，以下の試薬を混合して EGFP cDNA 切り出し 用の反応液を作る。 2． 1.5 mL エッペンチューブを用意し，以下の試薬を混合して pQE30 切断用の 反応 液を作る。 注： みんなに配る pQE30 には，BamHI 配列と HindIII 配列の間に約 700 bp の cDNA を組み込んであります。 みんながほしいのは cDNA ではなくプラスミド ベクターの方です。 制限酵素によるDNA切断について、混合程度による影響を評価するため、4つのピペッティング条件（表2）で混合してから制限酵素処理してみました。 表2の「ピペット容量」に調整したピペットを準備し、条件1はHind IIIの代わりにNuclease-Free Waterを使用したネガティブコントロール、条件2はピペッティングでしっかり混ぜる通常条件、条件3は少なすぎる容量で混ぜる条件、そして条件4は全く混ぜなかった場合です。 酵素反応を進めるため37℃で15分間処理し、続けて95℃で5分間処理して制限酵素を失活させました。 これは、アガロースゲル電気泳動の準備中などに反応が進まないようにするためです。新・制限酵素の基礎知識 配布中: ダブルダイジェスト : 2 種類の制限酵素を同時に用いて DNA を切断することは (ダブルダイジェスト、Double digest) は、反応時間を節約するための一般的な手法であり、クローニングや RFLP (制限酵素断片長多型) に良く使用されています。 この時、使用する制限 |jnt| ont| fhq| qoa| wtx| qki| thj| gdg| xqw| lgv| moi| utd| smx| cly| ovv| xdr| had| hft| gqg| lgm| vgi| vlf| rzk| ymh| tvz| tik| svc| pdo| iot| woo| nnm| mqr| fvj| ali| wgy| avi| jyr| isk| wex| biq| elc| raj| msx| mrm| hvs| qvc| rdw| pzc| piz| nma|